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更新時(shí)間:2024-11-04
兔脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
脈絡(luò)膜 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X8022 |
細(xì)胞簡介:
兔脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮分離自眼球脈絡(luò)膜組織;脈絡(luò)膜在視網(wǎng)膜和鞏膜之間,含有豐富血管和色素細(xì)胞,對外力沖擊的耐受性較視網(wǎng)膜差,當(dāng)眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時(shí),堅(jiān)硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用,使脈絡(luò)膜在內(nèi)外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡(luò)膜呈暗褐色,圍繞視神經(jīng)乳頭部有照膜,為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡(luò)膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜,由纖維組織、小血管和毛細(xì)血管組成,軟而薄,棕紅色,在鞏膜和視網(wǎng)膜之間,續(xù)連于睫狀體后方。脈絡(luò)膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層,其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網(wǎng)膜外層及玻璃體,并有遮光作用,使反射的物象清楚。同時(shí)對視覺系統(tǒng)起保護(hù)作用,對整個(gè)視覺神經(jīng)有調(diào)節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方,含豐富的血管和色素細(xì)胞,有營養(yǎng)和遮光作用。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
酸性成纖維生長因子 英文名稱: acid fibroblast growth factor 規(guī)格: 英文縮寫: a-FGF
堿性成纖維生長因子 英文名稱: basic fibroblast growth factor 規(guī)格: 英文縮寫: b-FGF
成纖維生長因子-4 英文名稱: fibroblast growth factor 4 規(guī)格: 英文縮寫: FGF-4
成纖維生長因子-4 英文名稱: fibroblast growth factor 4 規(guī)格: 英文縮寫: FGF-4
豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)試劑盒 ,英文名: TGFβ1 ELISA Kit
Human pulmonary activation regulated chemokine (PAFA/CCL18) ELISA Kit 人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PAFA/CCL18)試劑盒
rabbitTestoterone,TELISAKit 兔子睪酮(T)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBDNFELISAKit大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子
細(xì)菌總巰基含量熒光定量試劑盒20次
RabbitCrosslaps,CrELISAKit兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)試劑盒規(guī)格:96T/48T
src原癌基因重組兔單克隆抗體
磷酸化核糖體S6K2蛋白激酶抗體
TNFSF12重組大鼠 TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
ELK1 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原 0.5mgELK1 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原
GADD45A重組人 GADD45A / DDIT-1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
IGF1 Protein Human 重組人 IGF1 / IGF-I 蛋白
PECAM1 Protein Mouse 重組小鼠 CD31 / PECAM-1 蛋白
ELK1 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原 0.5mgELK1 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原
IGF1 Protein Human 重組人 IGF1 / IGF-I 蛋白
TNFSF12重組大鼠 TNFSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
PECAM1 Protein Mouse 重組小鼠 CD31 / PECAM-1 蛋白
GADD45A重組人 GADD45A / DDIT-1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
兔脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠賴酰氧化酶樣蛋白2(LOXL2)試劑盒 ,英文名: LOXL2 ELISA Kit
Monkey maix metalloproteinase 11 (MMP11) ELISA Kit基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)試劑盒
RatUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforFT4(HumanFreeThyroxine)ELISAKit人游離甲狀腺素
細(xì)胞琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量試劑盒20次
RatProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit大鼠前心肽(Pro-ANP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
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