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更新時間:2024-10-29
大鼠真皮微血管內(nèi)皮細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
皮膚組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細胞樣 | YS-01X7588 |
細胞簡介:
大鼠真皮微血管內(nèi)皮分離自真皮組織;真皮,位于表皮深層,向下與皮下組織相連,真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維,使皮膚既有彈性,又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細胞(MEC)在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域,由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟,人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比,對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內(nèi)皮細胞,則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠真皮微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠真皮微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠淋巴球性脈絡(luò)叢腦膜病毒抗體(LCM-Ab)試劑盒 96T/48T
小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)試劑盒 96T/48T
小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)試劑盒 96T/48T
小鼠酪蛋白酶試劑盒 96T/48T
小鼠葡萄糖激酶(GCK)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human thrombin thrombomodulin complex regulation (T-TM) ELISA Kit 人血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)試劑盒
HumanCollagen-likeBioproteinⅡ,HCBⅡELISAKit 人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Heneggphosvitinphosphopeptides,PPP試劑盒雞蛋卵黃高0蛋酸肽(PPP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母細胞線粒體DNA萃取試劑盒10/20次
MouseBeta-Endorphieceptor,β-EPRELISAKit小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)試劑盒規(guī)格:96T/48T
堿性核蛋白1/鋅指蛋白basonuclin抗體
細胞周期蛋白1結(jié)合蛋白抗體
PDGFRA重組大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein
CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)
CCL21重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein
CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
SERPINA11 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA11 蛋白
CYP450(Cytochrome P450 monooxygenase 0.5mgCYP450(Cytochrome P450 monooxygenase) 細胞色素P450單氧化酶(多肽抗原)
CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
PDGFRA重組大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白 Protein
SERPINA11 Protein Mouse 重組小鼠 SerpinA11 蛋白
CCL21重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白 Protein
大鼠真皮微血管內(nèi)皮細胞大鼠脂質(zhì)運載蛋白1(LCN1)試劑盒 ,英文名: LCN1 ELISA Kit
Mouse soluble myosin heavy chain 2 (sMHC-2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)試劑盒
MouseFractalkine,FKELISAKit 小鼠趨化因子(FK)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanHomocysteine(Hcy)ELISAKit人血漿同型半胱
B2比色法定量試劑盒20次
ELISAKitKAF大鼠角化細胞內(nèi)分泌因子
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
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