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更新時(shí)間:2024-10-29
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產(chǎn)品名稱:大鼠胰腺星狀細(xì)胞
組織來源:胰腺組織
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠胰腺星狀分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細(xì)胞分泌胰島素,降低血糖;γ細(xì)胞分泌,以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌;PP細(xì)胞分泌胰多肽,抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,活化的胰腺星狀細(xì)胞(PSC)是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞,PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴,并表達(dá)Desmin蛋白,活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-SMA)。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的維生素A脂滴可以被油紅O染成紅色,陽性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn),原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d,胞漿中仍可見明顯的脂滴,傳代后,橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin,48h后Desmin基本不再表達(dá)。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA,隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)和傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA,而不再表達(dá)Desmin,說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動(dòng)了激活過程,至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活,傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型,目前研究發(fā)現(xiàn):胰腺受損時(shí),在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化,促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胰腺星狀采用膠原酶制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胰腺星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a)、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b)、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠可溶性壞死因子-α受體 英文名稱: soluble tumor necrosis factor receptor 1 規(guī)格: 英文縮寫: Stnf-αR
小鼠組織多肽抗原 英文名稱: Tissue Polypeptide Aigen 規(guī)格: 英文縮寫: TPA
小鼠血小板生成素 英文名稱: Thromboietin 規(guī)格: 英文縮寫: TPO
小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 英文名稱: tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 規(guī)格: 英文縮寫: AIL/APO 2L
小鼠Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human coagulation factor IX (F IX) ELISA Kit 人Ⅸ(FⅨ)試劑盒
Humanlowmolecular-weightprotein/proteasomebeta-typesubunit,LMP7/PSMB9ELISAKit 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Human17-Hydroxyprogesterone,17-OHP試劑盒人17羥孕同(17-OHP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母細(xì)胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測(cè)定試劑盒20/200次
MouseAquaporin0,AQP-0ELISAKit小鼠水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒規(guī)格:96T/48T
即刻早期應(yīng)答蛋白5抗體
細(xì)胞角蛋白20重組兔單克隆抗體
PTPRC重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標(biāo)簽) Protein
鈣結(jié)合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)
CRIPT重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein
CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白
UL16結(jié)合蛋白2(ULBP2)重組蛋白 Recombinant UL16 Binding Brotein 2 (ULBP2)
CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CD84重組小鼠 CD84 蛋白 Protein
EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
EPHA3重組人 EphA3 蛋白 Protein
大鼠胰腺星狀細(xì)胞大鼠中性粒細(xì)胞明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)試劑盒 ,英文名: NGAL ELISA Kit
Mouse soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)試劑盒
MouseFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit 小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanHypotheticalproteinLOC677168ELISAKit人假定蛋白LOC677168
B12比色法定量試劑盒20次
ELISAKitHpt/HP大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白
收到細(xì)胞如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作
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