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更新時(shí)間:2024-10-29
大鼠浦肯野細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
小腦組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 神經(jīng)元細(xì)胞樣 | YS-01X7739 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠浦肯野分離自小腦皮質(zhì)組織;小腦的表面被覆著一層灰質(zhì),叫小腦皮質(zhì),小腦皮質(zhì)分為3層,從表及里分別為分子層、浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層。皮質(zhì)里含有星狀細(xì)胞、籃狀細(xì)胞、浦肯野細(xì)胞、高爾基細(xì)胞和顆粒細(xì)胞等5種神經(jīng)元。浦肯野細(xì)胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維,終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核。浦肯野細(xì)胞(Purkinje cell)是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的能夠傳出沖動(dòng)的神經(jīng)元。人的小腦皮質(zhì)約有1500萬個(gè)浦肯野細(xì)胞。浦肯野細(xì)胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點(diǎn)是傳導(dǎo)性強(qiáng),傳導(dǎo)速度快,可達(dá)4000mm/s。屬快反應(yīng)自律型細(xì)胞,具有舒張期自動(dòng)除極化的性能,因而有自律性,但自律性強(qiáng)度明顯低于竇房結(jié)P細(xì)胞。這類細(xì)胞常常平行排列,細(xì)胞內(nèi)電阻低,只有心室細(xì)胞的1/3。小腦:浦肯野細(xì)胞是小腦皮質(zhì)中最大的神經(jīng)元,細(xì)胞體呈梨形,頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突,向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂,形如展開的、扁薄的扇形,鋪展在與小腦葉片長(zhǎng)軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘,與傳入纖維構(gòu)成廣泛的突觸聯(lián)系,接受傳入小腦的全部信息。軸突由細(xì)胞底部(與主樹突相對(duì)方向)發(fā)出,細(xì)長(zhǎng),離開胞體不遠(yuǎn)便形成有髓神經(jīng)纖維,向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開皮質(zhì)進(jìn)入白質(zhì),組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維,終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團(tuán)。一個(gè)浦肯野細(xì)胞的軸突約形成500個(gè)終末膨大,約與小腦深部核團(tuán)的35個(gè)神經(jīng)元形成突觸。心臟浦肯野細(xì)胞常常平行排列,幾個(gè)細(xì)胞互相以漿膜連接排成一個(gè)小束,小束外包繞著基底膜。細(xì)胞內(nèi)含肌原纖維很少,胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網(wǎng),細(xì)胞內(nèi)電阻低,只有心室細(xì)胞的1/3。浦肯野細(xì)胞內(nèi)無橫管系統(tǒng),但膜電容比收縮細(xì)胞大,可能是由于其閏盤結(jié)構(gòu)廣泛而復(fù)雜,提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細(xì)胞閏盤的主要成分是縫隙連接,粒著膜占的比例很少,這些可能是構(gòu)成浦肯野細(xì)胞傳導(dǎo)快的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠浦肯野采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠浦肯野經(jīng)Neph3免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含脂質(zhì)濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 不增殖;不傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人粘蛋白21(MUC21)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human MUC21 (Mucin 21) ELISA Kit
人伴侶蛋白10(CPN10)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human CPN10 (Chaperonin 10) ELISA Kit
人趨化素(CHEM)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human CHEM(Chemerin) ELISA Kit
人趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit
豚鼠白介素2(IL-2)試劑盒 ,英文名: IL-2 ELISA Kit
Human ubiquitin decomposition enzyme (DUB) ELISA Kit 人泛素分解酶(DUB)試劑盒
RabbitIerleukin3,IL-3ELISAKit 兔子白介素3(IL-3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBeta-DFELISAKit大鼠β-防御素
細(xì)菌樣品二維電泳裂解液用于細(xì)菌蛋白二維電泳
RabbitGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
PRDM鋅指轉(zhuǎn)錄因子PRDM13抗體
淋巴細(xì)胞性白血病相關(guān)序列1抗體
SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein
CD31 (PECAM-1 0.5mgCD31 (PECAM-1) 血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(抗原)
CCL11重組人 CCL11 蛋白 Protein
ISG15 Protein Human 重組人 ISG15 / G1P2 蛋白
SELP Protein Rat 重組大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CD31 (PECAM-1 0.5mgCD31 (PECAM-1) 血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(抗原)
ISG15 Protein Human 重組人 ISG15 / G1P2 蛋白
SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein
SELP Protein Rat 重組大鼠 SELP / P Selectin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CCL11重組人 CCL11 蛋白 Protein
大鼠浦肯野細(xì)胞兔子端粒酶(TE)ELISA 試劑盒
Human ichinella aibody (ichinella Ab) ELISA Kit 人旋毛蟲抗體(ichinella Ab)試劑盒
Humanai-lymphocytotoxicaibody,ALA/LCAELISAKit 人抗淋巴細(xì)胞毒抗體(ALA/LCA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanEpidermalgrowthfactor,EGF試劑盒人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織PLK3激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
HumanPancreaticAmylase,PAMYELISAKit人胰(PAMY)試劑盒規(guī)格:96T/48T
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