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更新時(shí)間:2024-10-29
大鼠胚胎肝母細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
胚胎;肝臟 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7652 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠胚胎肝母分離自胚胎肝組織;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官,位于機(jī)體中的腹部位置,在右側(cè)橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟起源于腹側(cè)前腸內(nèi)胚層細(xì)胞(一種多潛能干細(xì)胞)。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠,前腸的原始上皮細(xì)胞接觸心肌中胚層后快速增殖,形成肝原基。大約1d后,原始上皮細(xì)胞侵入原始橫膈,繼續(xù)分化為幼稚肝臟上皮細(xì)胞,這些細(xì)胞先表達(dá) AFP 然后是ALb。幼稚肝臟上皮細(xì)胞很快成熟,并進(jìn)一步分化為肝細(xì)胞或膽管上皮細(xì)胞,因?yàn)榇似诘母闻K上皮細(xì)胞其具有向這兩種肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞雙向分化的潛能,所以又稱肝母細(xì)胞。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎肝母采用膠原酶消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎肝母經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒 96T/48T
小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)試劑盒 96T/48T
小鼠纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)試劑盒 96T/48T
小鼠纖連蛋白(FN)試劑盒 96T/48T
小鼠胃泌素(GT)試劑盒 96T/48T
Human phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 人0脂酶A2(PL-A2)試劑盒
HumanAmylaseELISAKit 人(Amylase)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ChickenIerleukin17,IL-17試劑盒雞白介素17(IL-17)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞FSH-BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)試劑盒規(guī)格:96T/48T
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人CD64單克隆抗體
賴特異性去甲基酶5B 抗體
PLK1重組小鼠 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein
RNA結(jié)合基元蛋白20(RBM20)重組蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 20 (RBM20)
IZUMO1重組人 IZUMO1 蛋白 Protein
CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
IL12A Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
泛素(Ub)重組蛋白 Recombinant Ubiquitin (Ub)
CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
PTPN11重組小鼠 SHP2 / PTPN11 蛋白 Protein
EFNA5 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白
PRKAR1A重組人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 Protein
大鼠胚胎肝母細(xì)胞兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA 試劑盒
People leils binding type AFP / AFP varia 1 (AFP-L1) ELISA kit E 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)試劑盒E
Humankappaimmunoglobulinlightchain,κ-IgLCELISAKit 輕鏈kappa抗體(κ-IgLC)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humandynamin2,DNM2試劑盒人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(NAT)活性比色法定量試劑盒20次
HumanPeussioxin,PTELISAKit人百日咳毒素(PT)試劑盒規(guī)格:96T/48T
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