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更新時(shí)間:2024-11-05
大鼠骨髓造血干細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
骨髓 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 圓形 | YS-01X8233 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠骨髓造血干分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時(shí),紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。造血干細(xì)胞具有自我更新能力并能分化為各種血細(xì)胞的前提細(xì)胞,最終生成各種血細(xì)胞成分,包括紅細(xì)胞,白細(xì)胞和血小板。造血干細(xì)胞需要根據(jù)機(jī)體的生理需求適時(shí)的補(bǔ)充血液系統(tǒng)各個(gè)成熟細(xì)胞組分。同時(shí)在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下,造血干細(xì)胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個(gè)細(xì)胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中,造血干細(xì)胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病,在其它實(shí)體瘤的治療中,比如淋巴瘤,生殖細(xì)胞瘤,乳腺癌,小細(xì)胞肺癌,主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。造血干細(xì)胞以不對(duì)稱有絲分裂方式進(jìn)行增殖,一個(gè)干細(xì)胞分裂產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞,一個(gè)分化為造血祖細(xì)胞,另一個(gè)則保持干細(xì)胞特征。造血干細(xì)胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細(xì)胞同時(shí),保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適,造血干細(xì)胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)(滋養(yǎng)層細(xì)胞),缺少滋養(yǎng)層細(xì)胞不增殖,無(wú)法長(zhǎng)期培養(yǎng),本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細(xì)胞灌裝發(fā)貨,不包含滋養(yǎng)層,因此收貨后建議盡快實(shí)驗(yàn)。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓造血干采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓造血經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:懸浮
細(xì)胞形態(tài):圓形
傳代特性:不建議傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠骨髓造血干體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
三乙酸 100g
ichloroaceticAcid 500g
N-三(羥甲基)甲基甘酸 500g
icine 100g
豚鼠免疫球蛋白G(IgG)試劑盒 ,英文名: IgG ELISA Kit
Human low density lipoprotein receptor (LDLR) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒
MonkeyhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBigETELISAKit大鼠大內(nèi)皮素
細(xì)菌尿素酶(UREASE)活性化學(xué)發(fā)光法定量試劑盒20次
rabbitleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit兔子白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒規(guī)格:96T/48T
半胱脫硫酶NFS1抗體
淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒Z蛋白抗體
TNF重組雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein
OXR (Orexin receptor 0.5mgOXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽)
SERPINB2重組人 SerpinB2 / PAI-2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein
IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
SERPINA1A Protein Mouse 重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
OXR (Orexin receptor 0.5mgOXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽)
IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
TNF重組雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein
SERPINA1A Protein Mouse 重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
SERPINB2重組人 SerpinB2 / PAI-2 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein
大鼠骨髓造血干細(xì)胞大鼠白細(xì)胞介素1α(IL-1α)試劑盒 ,英文名: IL-1α ELISA Kit
Lens culinaris agglinin (LCA) ELISA Kit 扁豆凝集素(LCA)試劑盒
Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanNon-PhosphorylatedInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人未0酸化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1
同位素真菌/酵母細(xì)胞蛋白核酸結(jié)合凝膠遷移電泳分析試劑盒20次
ELISAKitsICAM-1大鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子1